| 摘要: | 關鍵詞：dehydroepiandrosterone，皮質固酮，腎上腺皮質細胞，ERK，MEK Dehydroepiandrosterone 可以降低高血糖、高血脂、減少肥胖，而且它是一種抗氧化劑， 可以減少糖尿病長期高血糖對組織的傷害。根據我們先前研究發現 dehydroepiandrosterone 可以直接作用腎上腺皮質zona fasciculata-reticularis 細胞，並且 dehydroepiandrosterone 可以抑制環單磷酸腺甘對去卵巢雌鼠腎上腺皮質zona fasciculata-reticularis 細胞刺激皮質固酮之分泌。根據文獻我們知道環單磷酸腺甘可以影響mitogen-activated protein kinase ， 所以， 本研究擬以離體研究來探討 dehydroepiandrosterone 是否會透過環單磷酸腺甘影響大鼠腎上腺皮質zona fasciculata-reticularis (ZFR)細胞之mitogen-activated protein kinase，進而影響皮質固酮分泌的作用機轉。大鼠犧牲後，取出腎上腺皮質組織，以collagenase 處理，製備腎上腺皮質之ZFR 細胞。將定量之ZFR 細胞於37oC 培養一小時。離體實驗分為二部份，第一部份探討dehydroepiandrosteron 是否透過 環單磷酸腺甘影響腎上腺皮質ZFR 細胞PKA 活性，進而影響皮質固酮之分泌。第二部份探討dehydroepiandrosterone 是否透過環單磷酸腺甘影響 mitogen-activated protein kinase 相關酵素之活性，進而影響腎上腺皮質ZFR 細胞分泌皮質固酮。在第一部份先加入H89（PKA inhibitor）作用一小時，再加入 dehydroepiandrosterone 合併8-Br-cAMP（一種較易滲透之cAMP 同類物）培養半小時後，測定細胞分泌皮質固酮之濃度以及細胞內PKA 的活性。第二部份定量之ZFR 細胞經過前培養一小時後，將 ZFR 細胞在37oC 培養於內含dehydroepiandrosterone 合併 8-Br-cAMP 或12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate9（activate ERK）的培養液中，培養 15 分鐘、30 分鐘、1 小時或2 小時後。細胞經離心、清洗、擊碎，利用Western-blotting 技術分別分析有活性的ERK、MEK、Ras、Rap-1、Raf1 或B-Raf，以及全部的ERK、 MEK、Ras、或Rap-1 的蛋白質表現。這些結果將有助於瞭解dehydroepiandrosterone 對去大鼠ZFR 細胞影響mitogen-activated protein kinase 的作用機轉。 |
